自動播放主要是由磁碟機或光碟機中的「AutoRun.inf」檔案控制，AutoRun.inf 裡面會設定自動執行的檔案位置，以下是 Windows XP 光碟中的 AutoRun.inf：
- [AutoRun]
- open=setup.exe
- icon=setup.exe,0
第一行是辨識碼，讓作業系統確定這不只是一個同樣名稱的檔案；第二行就是要作業系統自動直型的檔案位置；第三行會設定視窗中光碟機的圖示。
當然不是每個設定檔張的都一模一樣，有些甚至會要求作業系統執行超過一個以上的檔案，這時設定檔案起來就會很複雜。
當一台電腦中毒時，病毒會先感染一些系統程式並常駐在你的電腦，當他偵測到有隨身碟接上電腦時，變會感染或是將病毒本身複製到隨身碟中隱藏，並加入一個 AutoRun.inf，並設定執行病毒檔。這樣當被感染的隨身碟接上另一台電腦時，系統讀到自動播放設定後，便會自動執行病毒。
